Assessment of genotyping markers in the molecular characterization of a population of clinical isolates of Fusarium in Colombia / Evaluación de marcadores de genotipificación en la caracterización molecular de una población de aislamientos clínicos de Fusarium en Colombia

Introduction: Fusarium is a very heterogeneous group of fungi, difficult to classify, with a wide range of living styles, acting as saprophytes, parasites of plants, or pathogens for humans and animals. Prevalence of clinical fusariosis and lack of effective treatments have increased the interest in the precise diagnosis, which implies a molecular characterization of Fusarium populations. Objective: We compared different genotyping markers in their assessment of the genetic variability and molecular identification of clinical isolates of Fusarium. Materials and methods: We evaluated the performance of the fingerprinting produced by two random primers: M13, which amplifies a minisatellite sequence, and (GACA)4, which corresponds to a simple repetitive DNA sequence. Using the Hunter Gaston Discriminatory Index (HGDI), an analysis of molecular variance (AMOVA), and a Mantel test, the resolution of these markers was compared to the reference sequencing-based and PCR genotyping methods. Results: The highest HGDI value was associated with the M13 marker followed by (GACA)4. AMOVA and the Mantel tests supported a strong correlation between the M13 classification and the reference method given by the partial sequencing of the transcription elongation factor 1-alpha (TEF1-α) and rDNA 28S. Conclusion: The strong correlation between the M13 classification and the sequencing-based reference together with its higher resolution demonstrates its adequacy for the characterization of Fusarium populations.

Introducción. Fusarium es un grupo heterogéneo de hongos, difícil de clasificar y con una amplia gama de estilos de vida, que actúa como saprófito, parásito de plantas o patógeno de humanos y animales. La prevalencia de la fusariosis clínica y la falta de tratamientos han incrementado el interés en su diagnóstico preciso, lo que conlleva la caracterización molecular de las poblaciones. Objetivo. Comparar marcadores de genotipificación en la evaluación de la variabilidad genética e identificación de aislamientos clínicos de Fusarium. Materiales y métodos. Se evaluó la huella genética producida por dos cebadores aleatorios: M13, que amplifica una secuencia minisatélite, y (GACA)4, que corresponde a una secuencia repetitiva de ADN. Utilizando el índice discriminatorio de Hunter Gaston (HGDI), el análisis de varianza molecular (AMOVA) y una prueba de Mantel, se comparó la resolución de estos marcadores con métodos de genotipificación basados en secuenciación y PCR. Resultados. El mayor HGDI se asoció con el marcador M13, seguido de (GACA)4. Las pruebas AMOVA y Mantel mostraron correlación entre las clasificaciones obtenidas con M13 y la referencia basada en la secuenciación parcial del factor de elongación de transcripción 1-alfa (TEF1-α) y el ADNr 28S. Conclusión. La fuerte correlación entre la clasificación obtenida con M13 y el método de referencia, así como su alta resolución, demuestran su idoneidad para la caracterización de poblaciones de Fusarium.

Characterization of a Coliphage AS1 isolated from sewage effluent in Pakistan / Caracterização de um colifago AS1 isolado de efluente de esgoto no Paquistão

The emergence of multi-drug resistant (MDR) bacterial strains, which are posing a global health threat has developed the interest of scientists to use bacteriophages instead of conventional antibiotics therapy. In light of an increased interest in the use of phage as a bacterial control agent, the study aimed to isolate and characterize lytic phages from sewage effluent. During the current study, bacteriophage AS1 was isolated from sewage effluent against E.coli S2. The lytic activity of phageAS1 was limited to E.coli S2 strain showing monovalent behavior. The calculated phage titer was 3.5×109 pfu/ml. PhageAS1 was stable at a wide range of pH and temperature. The maximum stability was recorded at 37ºC and pH 7.0, while showing its normal lytic activity at temperature 60ºC and from pH 5.0 to 11.0 respectively. At temperature 70ºC, phage activity was somewhat reduced whereas, further increase in temperature and decrease or increase in pH completely inactivated the phage. From the current study, it was concluded that waste water is a best source for finding bacteriophages against multi-drug resistant bacterial strains and can be used as bacterial control agent.

O surgimento de cepas bacterianas multirresistentes (MDR), que representam uma ameaça global à saúde, desenvolveu o interesse dos cientistas em usar bacteriófagos em vez da terapia convencional com antibióticos. Diante do crescente interesse no uso de fago como agente de controle bacteriano, o estudo visou isolar e caracterizar fagos líticos de efluente de esgoto. Durante o estudo atual, o bacteriófago AS1 foi isolado de efluente de esgoto contra E. coli S2. A atividade lítica de phageAS1 foi limitada à cepa E. coli S2, apresentando comportamento monovalente. O título de fago calculado foi de 3,5 x 109 ufp/ml. PhageAS1 foi estável em uma ampla faixa de pH e temperatura. A estabilidade máxima foi registrada a 37ºC e pH 7,0, enquanto mostrou atividade lítica normal em temperatura de 60ºC e pH 5,0 a 11,0, respectivamente. Na temperatura de 70ºC, a atividade do fago foi um pouco reduzida, enquanto o aumento adicional da temperatura e a diminuição ou aumento do pH inativaram completamente o fago. Com base no estudo atual, concluiu-se que a água residual é a melhor fonte para encontrar bacteriófagos contra cepas bacterianas multirresistentes e pode ser usada como agente de controle bacteriano.

Characterization of a Coliphage AS1 isolated from sewage effluent in Pakistan

Abstract The emergence of multi-drug resistant (MDR) bacterial strains, which are posing a global health threat has developed the interest of scientists to use bacteriophages instead of conventional antibiotics therapy. In light of an increased interest in the use of phage as a bacterial control agent, the study aimed to isolate and characterize lytic phages from sewage effluent. During the current study, bacteriophage AS1 was isolated from sewage effluent against E.coli S2. The lytic activity of phageAS1 was limited to E.coli S2 strain showing monovalent behavior. The calculated phage titer was 3.5×109 pfu/ml. PhageAS1 was stable at a wide range of pH and temperature. The maximum stability was recorded at 37ºC and pH 7.0, while showing its normal lytic activity at temperature 60ºC and from pH 5.0 to11.0 respectively. At temperature 70ºC, phage activity was somewhat reduced whereas, further increase in temperature and decrease or increase in pH completely inactivated the phage. From the current study, it was concluded that waste water is a best source for finding bacteriophages against multi-drug resistant bacterial strains and can be used as bacterial control agent.

Resumo O surgimento de cepas bacterianas multirresistentes (MDR), que representam uma ameaça global à saúde, desenvolveu o interesse dos cientistas em usar bacteriófagos em vez da terapia convencional com antibióticos. Diante do crescente interesse no uso de fago como agente de controle bacteriano, o estudo visou isolar e caracterizar fagos líticos de efluente de esgoto. Durante o estudo atual, o bacteriófago AS1 foi isolado de efluente de esgoto contra E. coli S2. A atividade lítica de phageAS1 foi limitada à cepa E. coli S2, apresentando comportamento monovalente. O título de fago calculado foi de 3,5 x 109 ufp/ml. PhageAS1 foi estável em uma ampla faixa de pH e temperatura. A estabilidade máxima foi registrada a 37ºC e pH 7,0, enquanto mostrou atividade lítica normal em temperatura de 60ºC e pH 5,0 a 11,0, respectivamente. Na temperatura de 70ºC, a atividade do fago foi um pouco reduzida, enquanto o aumento adicional da temperatura e a diminuição ou aumento do pH inativaram completamente o fago. Com base no estudo atual, concluiu-se que a água residual é a melhor fonte para encontrar bacteriófagos contra cepas bacterianas multirresistentes e pode ser usada como agente de controle bacteriano.

Characterization of a Coliphage AS1 isolated from sewage effluent in Pakistan / Caracterização de um colifago AS1 isolado de efluente de esgoto no Paquistão

The emergence of multi-drug resistant (MDR) bacterial strains, which are posing a global health threat has developed the interest of scientists to use bacteriophages instead of conventional antibiotics therapy. In light of an increased interest in the use of phage as a bacterial control agent, the study aimed to isolate and characterize lytic phages from sewage effluent. During the current study, bacteriophage AS1 was isolated from sewage effluent against E.coli S2. The lytic activity of phageAS1 was limited to E.coli S2 strain showing monovalent behavior. The calculated phage titer was 3.5×109 pfu/ml. PhageAS1 was stable at a wide range of pH and temperature. The maximum stability was recorded at 37ºC and pH 7.0, while showing its normal lytic activity at temperature 60ºC and from pH 5.0 to11.0 respectively. At temperature 70ºC, phage activity was somewhat reduced whereas, further increase in temperature and decrease or increase in pH completely inactivated the phage. From the current study, it was concluded that waste water is a best source for finding bacteriophages against multi-drug resistant bacterial strains and can be used as bacterial control agent.

O surgimento de cepas bacterianas multirresistentes (MDR), que representam uma ameaça global à saúde, desenvolveu o interesse dos cientistas em usar bacteriófagos em vez da terapia convencional com antibióticos. Diante do crescente interesse no uso de fago como agente de controle bacteriano, o estudo visou isolar e caracterizar fagos líticos de efluente de esgoto. Durante o estudo atual, o bacteriófago AS1 foi isolado de efluente de esgoto contra E. coli S2. A atividade lítica de phageAS1 foi limitada à cepa E. coli S2, apresentando comportamento monovalente. O título de fago calculado foi de 3,5 x 109 ufp/ml. PhageAS1 foi estável em uma ampla faixa de pH e temperatura. A estabilidade máxima foi registrada a 37ºC e pH 7,0, enquanto mostrou atividade lítica normal em temperatura de 60ºC e pH 5,0 a 11,0, respectivamente. Na temperatura de 70ºC, a atividade do fago foi um pouco reduzida, enquanto o aumento adicional da temperatura e a diminuição ou aumento do pH inativaram completamente o fago. Com base no estudo atual, concluiu-se que a água residual é a melhor fonte para encontrar bacteriófagos contra cepas bacterianas multirresistentes e pode ser usada como agente de controle bacteriano.

Hidrogeis de polivinil-álcool (PVA) contendo o bacteriófago UFV-AREG1 para aplicação como curativo adesivo para a indústria de alimentos / Polyvinyl-alcohol (PVA) hydrogel containing the UFV-AREG1 bacteriophagus for application as a curative adhesive for the food industry

Infecções cutâneas obtidas por cortes nas mãos de manipuladores podem gerar contaminação nos alimentos. O objetivo deste trabalho foi incorporar o bacteriófago UFV-AREG1 em hidrogel de álcool poli(vinílico) – PVA, aplicando-o futuramente como curativo adesivo. Foi adicionado 1,0 mL de solução do fago no PVA e seco em estufa por 48 h. Após, os hidrogeis foram submetidos a testes de Intumescimento, Espectroscopia no infravermelho (FTIR) e efeito antimicrobiano sobre E. coli O157:H7. O intumescimento do PVA-fago foi maior que o PVA-controle (p<0,05). A área de inibição do PVA-fago foi de 3,715 cm2 contra 2,916 cm2 do controle. As análises do FTIR mostraram um pico para o PVA-fago não encontrado no PVA-controle. Foi possível incorporar o bacteriófago em hidrogel de PVA e avaliar sua liberação para posterior aplicação como curativo adesivo.

Aislamiento y caracterización del bacteriófago Va1 específico a Vibrio alginolyticus

Vibrio alginolyticus está asociado a enfermedades en acuicultura. El uso indiscriminado de antibióticos ha conllevado a la búsqueda de alternativas en el tratamiento de enfermedades bacterianas, entre ellas la aplicación de bacteriófagos, los cuales infectan y destruyen selectivamente bacterias. En ese sentido, en este trabajo se aisló un bacteriófago altamente lítico a V. alginolyticus el cual fue denominado Va1, con el objetivo de evaluar los parámetros físicos químicos en los cuales es viable. Para esto, se evaluó al bacteriófago Va1 en diferentes condiciones de pH, temperatura, cloroformo. El fago Va1 presenta mayores títulos a 20 y 30 °C y pH de 5 a 8 disminuyendo su viabilidad a partir de 40 °C y en unidades de pH menores de 5. La exposición al cloroformo redujo la viabilidad del fago Va1 en un 25%. A partir de la curva de un paso se determinó que el periodo de latencia y el tamaño de la explosión fueron de 20 minutos y 192 UFP/centro infectivo respectivamente. Al microscopio electrónico de transmisión el fago Va1 evidencio una cabeza icosaedrica y una cola no contráctil, características propias de la familia Podoviridae. En conclusión, el fago Va1 presenta características potenciales para su uso en fagoterapia

Vibrio alginolyticus is associated with diseases in aquaculture. The misuse of antibiotics has led to the search for alternatives in the treatment of bacterial diseases, among them the application of bacteriophages that infect and destroy bacteria selectively. In this way, a highly lytic V. alginolyticus bacteriophage, termed Va1, was isolated, with the aim to evaluate its physical chemical parameters. For this purpose, different temperature, pH, chloroform exposure and host range conditions were evaluated. The temperature stability of phage Va1 showed higher titers at 20 and 30 °C decreasing from 40 °C. With respect to pH, the highest titers for the bacteriophage were between 5 and 8, and chloroform exposure reduced viability of the Va1 phage by 25%. The one-step curve determined that the latency period and the burst size were 20 minutes and 192 PFU / infective center respectively. Under the transmission electron microscope, the Va1 phage showed an icosahedral head and a non-contractile tail, belonging to the Podoviridae family. In conclusion, Va1 phage presents potential characteristics for use in phage therapy

Efeito antimicrobiano do bacteriófago geneticamente modificado φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA sobre cepas de E. faecalis em biofilme estático e em canais radiculares infectados / Antibacterial effect of a Genetically-Engineered Bacteriophage φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA on static biofilms and on Dentin Infected with E. faecalis

A presença de micro-organismos no sistema de canais radiculares (SCR) tem sido apontada como uma das principais causas de insucesso da terapia endodôntica. A capacidade de formar biofilme e penetrar nos túbulos dentinários são fatores de sobrevivência que favorecem a perpetuação de micro-organismos no interior do SCR. Terapias que promovam a desorganizazão de biofilmes e eliminação de bactérias dentro dos túbulos dentinários são fundamentais para a desinfecção endodôntica. Uma terapia descoberta há um século, denominada de Bacteriofagoterapia, baseia-se na utilização de vírus capazes de infectar e matar bactérias. Esta abordagem antimicrobiana tem recebido bastante atenção atualmente por representar uma alternativa para o tratamento de doenças causadas por bactérias multirresistentes aos antibióticos. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de um bacteriófago modificado geneticamente, φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA, para eliminar biofilmes de duas cepas de E. faecalis: JH2-2 (sensível à vancomicina e resistente ao ácido fusídico e à rifampicina) e V583 (resistente à vancomicina). Este estudo foi dividido em dois experimentos distintos. No primeiro experimento, biofilmes estáticos de 48 horas de cepas de E. faecalis JH2-2 (pMSP3535 nisR / K) ou V583 (pMSP3535 nisR / K) formados em lâminulas de vidro (coverslips) foram inoculados por suspensão do bacteriófago φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA. Após 48 horas de incubação, a biomassa bacteriana foi fotografada por microscopia confocal e as células viáveis foram quantificadas por medição de unidades formadoras de colônias (UFC). No segundo experimento, segmentos radiculares de dentes humanos extraídos foram cimentados em dispositivos vedáveis de duas câmaras para formar modelos ex vivo com dentina infectada, contendo solução tampão na câmara inferior. Os modelos foram inoculados com uma suspensão de E. faecalis V583 ou E. faecalis JH2-2. Após sete dias de incubação a 37°C, adicionou-se ao canal de cada segmento de dentina infectada dos grupos 2 e 5 uma suspensão do fago geneticamente modificado, φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA e manteve-se a incubação por mais 72 horas. Os segmentos de dentina foram instrumentados com Gates Glidden e a solução tampão foi aliquotada para semeadura e contagem de UFC e aferição do título residual de células de E. faecalis. Os resultados do primeiro experimento mostraram uma diminuição de 10-100 vezes (p≤ 0,05) das células viáveis (UFC / biofilme) após tratamento com bacteriófago, o que foi consistente com a comparação das imagens de biofilme tratado e não tratado visualizadas com projeções máximas da série Z. No segundo experimento a titulação de E. faecalis verificada após tratamento com o bacteriófago foi reduzida em 18% para os modelos infectados com JH2-2 e em 99% (p≤ 0,05) nos modelos infectados com V583. Com base nesses resultados, pode-se concluir que a biomassa dos biofilmes de E. faecalis, tanto sensíveis quanto resistentes à vancomicina, foi significantemente reduzida após a infecção pelo bacteriófago φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA. Além disso, o tratamento da dentina infectada por E. faecalis com bacteriófago φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA resultou em diminuição da população bacteriana residual de cepas sensíveis e resistentes à vancomicina, alcançando significância estatística no grupo que utilizou a cepa V583.

Residual microorganisms in the root canal system (RCS) have been identified as the main cause of endodontic therapy failure. The ability to form a biofilm and penetrate the dentin tubules are survival factors that favor the perpetuation of microorganisms within the RCS. Therapies that promote the disorganization of biofilms and elimination of bacteria within the dentinal tubules are essential for endodontic disinfection. A therapy discovered a century ago called Bacteriophage Therapy is based on the use of viruses capable of infecting and killing bacteria. Recently, this antimicrobial approach has been receiving considerable attention since it represents an alternative for the treatment of diseases caused by multiresistant antibiotic bacteria. The aim of this study was to evaluate the efficacy of a genetically engineered bacteriophage, φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA, to disrupt biofilms of two Enterococcus faecalis strains: JH2-2 (vancomycin sensitive) and V583 (vancomycin resistant). This study was divided into two separate experiments. In the first experiment, 24 hour static biofilms of E. faecalis strains JH2-2(pMSP3535 nisR/K) and V583(pMSP3535 nisR/K) formed on cover slips were inoculated with bacteriophage φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA. After 24 and 48 hours incubation, the bacterial biomass was imaged by confocal microscopy and viable cells were quantified by colony forming unit (CFU) measurement. In the second experiment, extracted human dentin root segments were cemented into sealable two-chamber devices, fabricated from syringe needle caps to form in vitro infected-dentin models. The models were inoculated with an overnight suspension of either E. faecalis V583 (vancomycin resistant strain) or E. faecalis JH2-2 (fusidic acid and rifampin resistant, vancomycin sensitive strain). After 7 days of incubation at 37°C, a suspension of a genetically engineered phage, φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA, was added to the root canal of each infected dentin segment, and the incubation was continued for an additional 72-hours. Dentin was harvested from the walls of each root canal and assayed for the residual titer of E. faecalis cells. The results from the first experiment showed a 10-100-fold fewer decrease in viable cells (CFU/biofilm) after bacteriophage treatment, which was consistent with comparisons of treated and untreated biofilm images visualized as max projections of the Z-series. On the second experiment, the recovered E. faecalis titer was reduced by 18% for the JH2-2 infected models, and by 99% for the V583 infected models. These results suggest that the biomass of E. faecalis biofilms, both sensitive and resistant to vancomycin, was significantly reduced after infection by bacteriophage φEf11/φFL1C(Δ36)PnisA. In addition, treatment of E. faecalis-infected dentin with the phage resulted in the decrease of the residual bacterial population for both susceptible and vancomycin resistant strains, reaching statistical significance in strain V583 group.

Una mezcla de bacteriófagos reduce los recuentos de Salmonella enterica serovar. Enteritis en tejidos de salmón fresco y ahumado / Bacteriophage cocktail reduces Salmonella enterica serovar. Enteritis counts in raw and somoked salmon tissues

El uso de bacteriófagos en el biocontrol de patógenos está adquiriendo cada vez más aceptación. En este estudio se evaluó la efectividad de bacteriófagos en la reducción de los recuentos de Salmonella Enteritidis en salmón fresco y ahumado. Para ello, 25 muestras por grupo fueron contaminadas con S. Enteritidis, tratadas con una mezcla de bacteriófagos e incubadas durante 10 días a 18 °C o a 4 °C. A los días 3, 6 y 10 se obtuvo una reducción signifi cativa de los recuentos de S. Enteritidis en las muestras de salmón fresco incubadas a ambas temperaturas: la reducción fue de entre 0,75 y 3,19 log10 UFC/g a 18 °C y de entre 2,82 y 3,12 log10 UFC/g a 4 °C. En salmón ahumado las reducciones fueron menores (entre 1,02 y 1,96 log10 UFC/g a 18 °C y entre 0,50 y 1,16 log10 UFC/g a 4 °C). Los resultados indican que estos bacteriófagos constituyen una potencial herramienta de biocontrol de S. Enteritidis en tejidos de salmón fresco y ahumado. © 2014 Asociación Argentina de Microbiología. Publicado por Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados

The use of bacteriophages for the biocontrol of food-borne pathogens is increasingly gaining acceptance. In this study, the effectiveness of bacteriophages to reduce Salmonella Enteritidis counts was evaluated in raw and smoked salmon tissues. Groups of 25 samples each were contaminated with S. Enteritidis, treated with a phage mix and then incubated for ten days at 18 °C and 4 °C. A signifi cant bacterial reduction was obtained on days 3, 6 and 10 in raw salmon samples incubated at 18 °C (from 0.75 to 3.19 log10 CFU/g) and at 4 °C (from 2.82 to 3.12 log10 CFU/g), whereas in smoked salmon lower reductions were achieved (from 1.02 to 1.96 log10 CFU/g at 18°C and from 0.50 to 1.16 log10 CFU/g at 4 °C). These results show the potential effectiveness of this bacteriophage cocktail as a biocontrol agent against S. Enteritidis in raw and smoked salmon tissues

Detecção de anticorpos séricos produzidos contra as proteínas do bacteriófago 17 do Aggregatibacter actinomycetemcomitans / Serum antibody detection against Aggregatibacter actinomycetemcomitan's bacteriophage 17 proteins

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) é uma bactéria associada à Periodontite Agressiva (PA). Ela invade tecidos moles, com ocorrência de lisogenia e bacteriófagos presentes em até 69% das subespécies. Estudos in vitro sugerem que a indução do bacteriófago (Aa17) ocorre numa co-cultura de Aa lisogênico com fibroblastos humanos. Se esta interação ocorre in vivo, com liberação do vírus, uma reação imunológica contra o Aa17 aconteceria. O objetivo deste estudo é constatar se anticorpos (AC) contra proteínas do Aa17 existem e estão associados à doença periodontal. Um objetivo adicional foi testar a resposta de AC contra os sorotipos do Aa. 52 indivíduos participaram: 31 com PA, 5 com Periodontite Crônica (PC) e 16 com Periodonto Saudável (PS). Soro foi coletado após a classificação clínica. As proteínas do Aa17 foram obtidas de preparações purificadas. As subespécies do Aa utilizadas para amostras de proteínas através de sonicação foram: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) – sorotipo A, 43718 (ATCC) – sorotipo B, 33384 (ATCC) – sorotipo C, IDH781 – sorotipo D, NJ9500 – sorotipo E and CU1000 – sorotipo F. As proteínas foram separadas em géis de poliacrilamida e transferidas para membranas de nitrocelulose. As reações de Western-blotting ocorreram com o AC primário sendo o soro de cada indivíduo. Todas as membranas foram lidas pelo sistema Odyssey que captura sinais no AC secundário (antihumano). A resposta de AC contra ao menos uma proteína do Aa17, assim como pelo menos um sorotipo do Aa foi observado em todos, com exceção de dois indivíduos (com PS), participantes. Um indivíduo do grupo PC e três do PA tiveram resposta de AC contra alguns, mas não todos os sorotipos do Aa. A resposta de AC contra todos os sorotipos foi o achado mais comum nos grupos PA (28/31), PS (14/16) e PC (4/5). A resposta de AC contra o complexo de proteínas do Aa17 foi observado em 7 indivíduos...

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) is a bacteria associated with Aggressive Periodontitis (AP). It invades soft tissues, with occurrence of lysogeny and bacteriophage presence up to 69% of Aa subspecies. In vitro studies suggested that bacteriophage (Aa17) induction occurs upon co-culture of Aa lysogens subspecies with human fibroblasts. If such an in vivo interaction resulted in Aa17 induction and release of virions, an immunologic reaction to Aa17 proteins could ensue. The purpose of this investigation was to learn whether serum antibodies (AB) to Aa17 proteins are found in human sera, and whether they are associated with periodontal disease. An additional purpose was to test the AB response against known Aa serotypes.52 individuals took part: 31 with AP, 5 with Chronic Periodontitis (CP) and 16 with a Healthy Periodontium (HP). Serum was collected after clinical classification. Aa17 proteins were obtained from purified Aa17 preparations. The Aa strains used for protein sampling through sonication were: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) – serotype A, 43718 (ATCC) – serotype B, 33384 (ATCC) – serotype C, IDH781 – serotype D, NJ9500 – serotype E and CU1000 – serotype F. Proteins were separated by SDS-PAGE gels and then transferred to nitrocellulose membranes. Western-blotting reactions were carried out with the primary AB being each subject’s serum. All membranes were read through the Odyssey system which captures signals from a dye in a secondary (antihuman) AB. AB response against at least one Aa17 protein, as well as a response to at least one Aa serotype, was observed in all but two individuals (with HP) who participated in the study. Serum from one individual from the CP group and three from the AP group had AB response to some, but not all Aa serotypes. AB response against all Aa serotypes was the most common finding in AP (28/31), HP (14/16) and CP (4/5) groups. AB response to the full complex...

Detecção de anticorpos séricos produzidos contra as proteínas do bacteriófago 17 do Aggregatibacter actinomycetemcomitans / Serum antibody detection against Aggregatibacter actinomycetemcomitan's bacteriophage 17 proteins

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) é uma bactéria associada à Periodontite Agressiva (PA). Ela invade tecidos moles, com ocorrência de lisogenia e bacteriófagos presentes em até 69% das subespécies. Estudos in vitro sugerem que a indução do bacteriófago (Aa17) ocorre numa co-cultura de Aa lisogênico com fibroblastos humanos. Se esta interação ocorre in vivo, com liberação do vírus, uma reação imunológica contra o Aa17 aconteceria. O objetivo deste estudo é constatar se anticorpos (AC) contra proteínas do Aa17 existem e estão associados à doença periodontal. Um objetivo adicional foi testar a resposta de AC contra os sorotipos do Aa. 52 indivíduos participaram: 31 com PA, 5 com Periodontite Crônica (PC) e 16 com Periodonto Saudável (PS). Soro foi coletado após a classificação clínica. As proteínas do Aa17 foram obtidas de preparações purificadas. As subespécies do Aa utilizadas para amostras de proteínas através de sonicação foram: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) – sorotipo A, 43718 (ATCC) – sorotipo B, 33384 (ATCC) – sorotipo C, IDH781 – sorotipo D, NJ9500 – sorotipo E and CU1000 – sorotipo F. As proteínas foram separadas em géis de poliacrilamida e transferidas para membranas de nitrocelulose. As reações de Western-blotting ocorreram com o AC primário sendo o soro de cada indivíduo. Todas as membranas foram lidas pelo sistema Odyssey que captura sinais no AC secundário (antihumano). A resposta de AC contra ao menos uma proteína do Aa17, assim como pelo menos um sorotipo do Aa foi observado em todos, com exceção de dois indivíduos (com PS), participantes. Um indivíduo do grupo PC e três do PA tiveram resposta de AC contra alguns, mas não todos os sorotipos do Aa. A resposta de AC contra todos os sorotipos foi o achado mais comum nos grupos PA (28/31), PS (14/16) e PC (4/5). A resposta de AC contra o complexo de proteínas do Aa17 foi observado em 7 indivíduos ...

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) is a bacteria associated with Aggressive Periodontitis (AP). It invades soft tissues, with occurrence of lysogeny and bacteriophage presence up to 69% of Aa subspecies. In vitro studies suggested that bacteriophage (Aa17) induction occurs upon co-culture of Aa lysogens subspecies with human fibroblasts. If such an in vivo interaction resulted in Aa17 induction and release of virions, an immunologic reaction to Aa17 proteins could ensue. The purpose of this investigation was to learn whether serum antibodies (AB) to Aa17 proteins are found in human sera, and whether they are associated with periodontal disease. An additional purpose was to test the AB response against known Aa serotypes.52 individuals took part: 31 with AP, 5 with Chronic Periodontitis (CP) and 16 with a Healthy Periodontium (HP). Serum was collected after clinical classification. Aa17 proteins were obtained from purified Aa17 preparations. The Aa strains used for protein sampling through sonication were: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) – serotype A, 43718 (ATCC) – serotype B, 33384 (ATCC) – serotype C, IDH781 – serotype D, NJ9500 – serotype E and CU1000 – serotype F. Proteins were separated by SDS-PAGE gels and then transferred to nitrocellulose membranes. Western-blotting reactions were carried out with the primary AB being each subject’s serum. All membranes were read through the Odyssey system which captures signals from a dye in a secondary (antihuman) AB. AB response against at least one Aa17 protein, as well as a response to at least one Aa serotype, was observed in all but two individuals (with HP) who participated in the study. Serum from one individual from the CP group and three from the AP group had AB response to some, but not all Aa serotypes. AB response against all Aa serotypes was the most common finding in AP (28/31), HP (14/16) and CP (4/5) groups. AB response to the full complex ...

Bacteriófagos para controle de bactérias patogênicas em alimentos / Bacteriophages for control of bacterial pathogens in foods

Nos últimos anos, um grande número de estratégias para minimizar a contaminação microbiana de alimentos tem sido explorado. Problemas com aceitabilidade e alteração nas características organolépticas dos alimentos, decorrentes de tratamentos físicos como o emprego do calor e da luz ultravioleta, têm sido descritos. Além disso, os consumidores estão buscando cada vez mais os alimentos naturais, isto é, isentos de conservantes químicos. Uma abordagem que tem sido objeto de interesse crescente é a utilização de bacteriófagos, que são vírus que infectam e matam as bactérias. Os bacteriófagos são componentes da microbiota natural da produção de alimentos, desde o campo até a comercialização; são estáveis nesses ambientes e são prontamente recuperados do solo, da água, de efluentes, das fezes e dos próprios alimentos. Os estudos para o controle de micro-organismos patogênicos em alimentos com o uso de bacteriófagos são promissores, mas ainda necessitam ser aperfeiçoados. O sucesso dessa metodologia dependerá da aceitação do consumidor dentre outros fatores. Por esta razão, é prudente considerar cuidadosamente a fonte de qualquer bacteriófago antes deste ser aplicado nos alimentos.

Over the last few years, a number of strategies to minimize the microbial load in raw products have beenexplored. Problems with the acceptability and deterioration of organoleptic properties have been described after physical treatments such as steam, dry heat and UV light. Moreover, consumers are looking for more natural foods, i.e. free from chemical preservatives. An approach that has been the object of growing interest is the use of bacteriophages, which are viruses that infect and kill bacteria. Bacteriophages are components of the natural microflora in the food production continuum from the farm to the retail outlet; they are stable in these environments and are readily recovered from soil, sewage, water, farm and processing plant effluents, feces, and retail foods. Studies on pathogens control in foods by using bacteriophage are promising, howeverthey have to be improved. The success of this methodology will depend on the consumer’s acceptance. In this way, it is recommended to carefully consider the origin of the phage before introducing it into foods.

Phage amplification assay as rapid method for Salmonella detection

The application of rapid methods is crucial for the HACCP program implantation in food industry. In this context, Phage Amplification Assay is a good candidate because is based on the interactions of phage and their host bacteria. This method using phage P22 was applied with to detect Salmonella cells in chicken breast. Samples of 25 g of chicken breast were diluted and the appropriate dilutions were used in phage amplification assay for Salmonella detection. After 3-4 h of incubation, it was observed a phage titre of approximately 10(4) pfu mL-1, indicating that there were Salmonella cells which were naturally present in the meat. The presence of Salmonella cells were verified by using direct plating on XLD agar and by conventional enrichment procedure. The colonies suspected to be Salmonella were serologically tested and were identified as belonging to the serogroups B (S. typhimurium group) and D (S. enteritidis group). It can be concluded that this method provides a rapid and alternative application for Salmonella detection in food samples reducing both time and laboratory work to 3-4 hours.

A aplicação de métodos rápidos é crucial para a implantação de programas de HACCP em indústrias de alimentos. Neste contexto, o método de amplificação de bacteriófagos é um instrumento de diagnóstico importante porque está baseado na interação dos bacteriófagos com suas células hospedeiras. Este método, usando o bacteriófago P22, foi aplicado para detectar Salmonella em peito de frango. Amostras de 25 g de peito de frango foram diluídas e as diluições apropriadas foram usadas no método de amplificação de bacteriófagos na detecção de Salmonella. Após 3-4 horas de incubação, foi observado uma titulação de partículas virais de, aproximadamente, 10(4) ufp mL-1 (unidades formadoras de placas virais), indicando a presença de células de Salmonella na carne de frango. A comprovação da presença de Salmonella neste produto foi verificada usando-se plaqueamento direto em ágar XLD e procedimento de enriquecimento convencional. As colônias suspeitas de Salmonella foram sorologicamente testadas e identificadas como pertencendo aos sorogrupos B (grupo de S. typhimurium) e D (grupo de S. enteritidis). Portanto, concluiu-se que este método pode ser aplicado, na detecção de Salmonella em alimentos, porque fornece rápido e conclusivo resultado, reduzindo o tempo de análise e o trabalho laboratorial para 3-4 horas.

Phage amplification assay as rapid method for Salmonella detection

The application of rapid methods is crucial for the HACCP program implantation in food industry. In this context, Phage Amplification Assay is a good candidate because is based on the interactions of phage and their host bacteria. This method using phage P22 was applied with to detect Salmonella cells in chicken breast. Samples of 25 g of chicken breast were diluted and the appropriate dilutions were used in phage amplification assay for Salmonella detection. After 3-4 h of incubation, it was observed a phage titre of approximately 10(4) pfu mL-1, indicating that there were Salmonella cells which were naturally present in the meat. The presence of Salmonella cells were verified by using direct plating on XLD agar and by conventional enrichment procedure. The colonies suspected to be Salmonella were serologically tested and were identified as belonging to the serogroups B (S. typhimurium group) and D (S. enteritidis group). It can be concluded that this method provides a rapid and alternative application for Salmonella detection in food samples reducing both time and laboratory work to 3-4 hours.

A aplicação de métodos rápidos é crucial para a implantação de programas de HACCP em indústrias de alimentos. Neste contexto, o método de amplificação de bacteriófagos é um instrumento de diagnóstico importante porque está baseado na interação dos bacteriófagos com suas células hospedeiras. Este método, usando o bacteriófago P22, foi aplicado para detectar Salmonella em peito de frango. Amostras de 25 g de peito de frango foram diluídas e as diluições apropriadas foram usadas no método de amplificação de bacteriófagos na detecção de Salmonella. Após 3-4 horas de incubação, foi observado uma titulação de partículas virais de, aproximadamente, 10(4) ufp mL-1 (unidades formadoras de placas virais), indicando a presença de células de Salmonella na carne de frango. A comprovação da presença de Salmonella neste produto foi verificada usando-se plaqueamento direto em ágar XLD e procedimento de enriquecimento convencional. As colônias suspeitas de Salmonella foram sorologicamente testadas e identificadas como pertencendo aos sorogrupos B (grupo de S. typhimurium) e D (grupo de S. enteritidis). Portanto, concluiu-se que este método pode ser aplicado, na detecção de Salmonella em alimentos, porque fornece rápido e conclusivo resultado, reduzindo o tempo de análise e o trabalho laboratorial para 3-4 horas.